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如何確保確保ELISA測定的特異性
發布時間:2020-09-20   點擊次數:823次
    ELISA是免疫診斷中的以固相酶聯免疫反應為基礎的一項技術,在抗原抗體檢測及病原體檢測方面得到了廣泛的應用,在臨床及科研應用上具有重要的意義。elisa方法檢測具有靈敏度高、特異性強、操作簡單、樣本量少等特點,無需特殊儀器,可手工操作,也可全自動化檢測,且檢測結果準確度高,重復性好。
  由于檢測的樣本量大,它不僅適用于臨床標本的檢查,還適合于血清流行病學篩查。ELISA根據其檢測原理的不同,可分為競爭法,間接法,夾心法,捕獲法等,不僅可檢測大分子物質,也可檢測低分子量的激素及小分子病原體。
  ELISA可檢測樣本多樣,包括血清,血漿,細胞培養液,尿液,糞便,唾液,腦脊液,細胞裂解液,組織提取物等,可用于各樣本體外定性或定量的測定。
  為了確保ELISA測定的特異性,洗板可清除非特異性結合物質,減少背景信號,增加分析的信噪比。
  手工洗板時,拍板要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離。使用半自動洗板時,應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出。為了達到較好的洗滌效果,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,即在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次。
  以HRP作為標記酶的ELISA試劑盒中使用的洗板液一般為含0.05%Tween20的中性PBS,其中,吐溫20的濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低實驗的靈敏度。
  
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