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關于Elisa試劑盒測抗原的競爭方法介紹
發布時間:2022-07-11   點擊次數:86次
  當抗原材料中的干擾物質不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺于陰性反應。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質,直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質,然后再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合,抗HBcELISA一般采用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合,洗滌后再加入酶標抗體,與結合在固相上的抗原反應??笻Be的檢測一般采用此法。
  Elisa試劑盒的實驗步驟:
  1.以稀釋液將待檢標本做適當稀釋(預試中確定)加入包被有已知抗原的酶標板中(50ul/孔),加封口膠帶于37℃作用30min。
  2.棄反應液,以沖洗液連續洗板5次并于吸水紙上拍干。
  3.加入酶標抗體(濃度在預試中確定)。加封口膠帶后于37℃作用30min。
  4.重復第2步。
  5.加底物(濃度在預試中確定),加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60min,其間不時觀察,顯色滿意后加終止液50ul/孔。
  6.于酶標儀測定OD值,OPD用492nm測定,TMB用450nm測定。
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