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ELISA試劑盒對溫度環境有哪些要求?
發布時間:2020-08-18   點擊次數:786次
     ELISA屬固相,抗原、抗體的結合只在固相表面上發作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標本,其間的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的時機,只有靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的進程,因而需經分散才干到達反響的終點。在其后參加的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時刻的溫育。
  ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。加樣時應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留意不可濺起,不可發作氣泡。
  加標本一般用微量加樣器,按規則的量參加板孔中。
  每次加標本應更換吸嘴,以免發作穿插污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,再在其間參加血清標本,然后在微型震動器上震動1分鐘以保證混和。
  加酶結合物使用液和底物使用液時可用定量多道加液器,使加液進程敏捷完成。在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶結合物后??乖贵w反響的完成需求有必定的溫度和時刻,這一保溫進程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。
  溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的適宜溫度。在建立ELISA辦法作反響動力學研究時,試驗表明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經1-2小時,ELISA試劑盒產品的生成可達高峰。為加速反響,可進步反響的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為完全,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中,以形成多的沉積。但因所需時刻太長,在ELISA中一般不予選用。
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