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用于ELISA測定的樣品如何收集和保存?
發布時間:2019-08-19   點擊次數:724次
 
  酶聯免疫吸附測定(ELISA)因其具有敏感性高、特異性強等優點,被廣泛應用于臨床檢測中的各種抗原和抗體的測定。盡管ELISA操作簡單,但是小實驗里也蘊含著大文章,ELISA操作各個環節對實驗的檢測效果影響較大,稍不注意就會產生假陽性或假陰性的結果。
  一般,ELISA可分為以下四大類:直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA、競爭抑制ELISA。其他的ELISA都隸屬于這四類ELISA或由這四類ELISA組合衍生。
  樣品收集和保存
  用于ELISA測定常用的臨床標本是血清(漿)。要注意避免嚴重溶血,因為血紅蛋白中含有具有類似過氧化物活性的血紅素基團,在孵育時很容易吸附于固相,與HRP底物反應產生假陽性。
  樣品采集及血清分離中要注意避免細菌污染,一方面細菌分泌的酶可能對抗原抗體等蛋白產生分解作用,另一方面,細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶會對相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。
  樣品應該要避免反復凍融。因反復凍融所產生的機械剪切力對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,從而引起假陰性結果。另外,樣品混勻時,不要劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。
  一般而言,如果在收集樣品的當天進行檢測,可將樣品及時儲存在4℃備用;而對隔天再檢測的樣本,應及時分裝后凍存在-20℃備用,若要長期保存樣品,將其置于-70℃凍存。
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